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Insbesondere führt die Aktivierung von JNK-1, aber nicht von JNK-2 durch toxische FFA puma basket rosa zu erhöhten zellulären Spiegeln der proapoptotischen BH3-Proteinmitglieder des Bcl-2-Proteins PUMA und die Stillegung dieses Todesmediators zur Abschwächung der Lipoapoptose [15]. Es ist auch bekannt, dass JNK Bim aktiviert [16], ein weiteres reines BH3-Protein, das zur Lipoapoptose beiträgt [12]. Somit kann ER-Stress direkt an eine Dysregulation von Bcl-2-Proteinen gekoppelt werden, die wiederum den mitochondrialen Weg der Apoptose auslösen. Zusammengenommen legen diese Beobachtungen nahe, dass FFA Lipoapoptose sowohl durch Induktion von PUMA als auch von Bim induziert, was wiederum zur Aktivierung des puma basket sale nachgeschalteten Todesmediators Bax führt.

Die Gesamt-RNA wurde aus den Zellen unter Verwendung des Trizol-Reagens (Invitrogen) extrahiert und mit Moloney-Maus-Leukämievirus-Reverse-Transkriptase (Invitrogen) und Random-Primern (Invitrogen) in komplementäre DNA revers transkribiert. Die Quantifizierung der komplementären DNA-Matrize wurde mit Echtzeit-PCR (LightCycler; Roche Applied Science) unter Verwendung von SYBR-Grün (Molecular Probes) als Fluorophor durchgeführt.

In Übereinstimmung mit unserer vorherigen Beobachtung [15, 27] erhöhte PA die PUMA- und Bim-Zellproteinspiegel (Abbildung 5A). Im Gegensatz dazu waren die zellulären Spiegel anderer Nur-BH3-Proteine   (Noxa, Bik, Bad, Bid), der proapoptotischen Multidomänen-Bcl-2-Proteine   (Bak, Bax) und des antiapoptotischen Proteins Bcl-X L unverändert. In Übereinstimmung mit seinen zytoprotektiven Wirkungen verringerte PO (PO 400 uM und PA 400 uM) die Bim- und PUMA-Induktion durch PA. Zusätzlich schwächte PO auch die PUMA-mRNA-Induktion durch PA ab (5B). Die Aktivierung von Bax, einem bekannten Mediator der mitochondrialen Dysfunktion, ist für die Induktion der Hepatozyten-Lipoapoptose nach der puma basket satin PUMA- und Bim-Induktion erforderlich [12, 15].

In der Tat können sowohl Bim als auch PUMA Bax direkt aktivieren, was wiederum mitochondriale Dysfunktion und Zelltod auslöst [14]. Aktiviertes Bax wurde durch Immunfluoreszenz unter Verwendung des monoklonalen 6A7-Antikörpers identifiziert, der die aktive Konformationsform von Bax nachweist [30]. In Übereinstimmung mit früheren Berichten [12, 15] wurde eine Bax-Aktivierung in PA-behandelten Zellen beobachtet, diese Aktivierung wurde jedoch abgeschwächt, wenn die Zellen mit PA plus PO (PA 800 uM, PO 400 uM) inkubiert wurden (5C). Zusammengenommen legen die Daten nahe, dass die Hemmung des ER-Stresses durch PO auch eine Dysregulation von Bcl-2-Proteinen durch cytotoxische FFA verhindert.