ÿþDes protéines basket blanche femme puma non mitochondriales à un transfert Western. Les signaux de bande de PUMA mitochondrial et de PUMA non mitochondrial ont été déterminés par densitomie à l'aide du logiciel NIH ImageJ, comme nous l'avons décrit précédemment [31]. Par la suite, l ampleur de la translocalisation mitochondriale de PUMA, appelée indice mtPUMA, a été calculée à l aide de l équation ci-dessous.Nous avons examiné un panel de huit lignées de cellules GBM et deux lignées de cellules AA pour l'expression de EGFR .

EGFRvIII et de membres pro-apoptotiques de la famille de protéines Bcl-2. Comme le montre la figure 1a, la majorité de ces lignées cellulaires co-expriment des taux élevés d'EGFR et de trois protéines pro-apoptotiques, basket femme puma noir à savoir PUMA, Bax et Bmf. En revanche, ces cellules expriment de faibles niveaux de Bad, Bim et Bok. Pour déterminer si EGFRvIII coexprimait également avec des protéines pro-apoptotiques similaires à l'EGFR, nous avons examiné trois xénogreffes basket femme puma pas cher de GBM portant l'EGFRvIII.

EGFR et EGFRvIII coexpriment paradoxalement avec des protéines pro-apoptotiques et interagissent spécifiquement avec PUMA dans le GBM. (A) Expression de EGFR et de protéines pro-apoptotiques dans des lignées cellulaires de gliomes malins humains. Des extraits cellulaires totaux isolés de huit lignées de GBM et de deux lignées de cellules AA ont été soumis à un transfert de Western pour déterminer les taux de protéines pro-apoptotiques EGFR et Bcl-2, y compris Bad, PUMA, Bax, basket homme puma Bim, Bmf et Bok.

À la lumière d une étude précédente [25] montrant que ErbB4 interagit avec Bcl-2 et le fait que EGFR / EGFRvIII et ErbB4 partagent une homologie structurelle, nous avons examiné si EGFR / EGFRvIII forme un complexe avec les trois protéines pro-apoptotiques qui co-expriment récepteurs. Comme indiqué par les résultats de l'immunoprécipitation (IP) / Western blot utilisant un anticorps anti-EGFR pour IP (Fig. 1c), EGFRvIII forme un complexe avec PUMA.

Un gliome de grade II (panneau inférieur) se colorent négativement pour les deux protéines. L'anticorps utilisé dans l'IHC EGFR / EGFRvIII reconnaît un épitope C-terminal présent dans les récepteurs EGFR et EGFRvIII, et des coupes tumorales consécutives ont été utilisées dans ces études. Le degré élevé de co-expression de EGFR / EGFRvIII-PUMA dans basket noir femme puma des échantillons de GBM primaires est cohérent avec les observations de la figure 1 avec les lignées cellulaires de GBM.

Conformément aux résultats de la figure S1, il a été constaté qu'une sous-population de GBM exprimait PUMA, mais pas des niveaux substantiels d'EGFR / EGFRvIII.EGFR / EGFRvIII et PUMA co-expriment dans des échantillons primaires de GBM et l'étendue de la co-expression est significativement corrélée au degré de gliome. de manière significative avec PUMA dans les GBM primaires. Une cohorte de 101 gliomes et 12 tissus cérébraux normaux a été soumise à une coloration IHC pour EGFR / EGFRvIII et PUMA.